Western Blot雜交膜轉印膜*纖維素膜NC膜與PVDF膜的區別
更新時間：2012-02-01 | 點擊率：11816
雜交膜轉印膜*纖維素膜NC膜與PVDF膜的區別
雜交膜轉印膜*纖維素膜NC膜與PVDF膜的區別
1. *纖維素膜
*纖維素膜是蛋白印跡廣泛使用的轉移介質，對蛋白有很強的結合能力，而且適用于各種顯色方法，包括同位素，化學發光(Luminol類)、常規顯色、染色和熒光顯色；背景低，信噪比高。NC膜的使用也很簡便，比如不需要甲醛預處理，只要在無離子水面浸潤排出膜內氣泡，再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了；比如NC膜很容易封閉，也不需要特別嚴謹的清洗條件。轉移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩定保存很長時間，不過要注意的是純的硝纖膜在比較脆，又容易卷，操作要小心，不適合用于需要多次重復清洗的用途--因為經不起多次“折磨”。選擇硝纖膜時要注意的是選擇合適的孔徑，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔徑的膜，小于20KD的話建議選擇0.2um的，如果小于7KD的話好選擇0.1um的膜。另外還要注意選擇純的NC膜--混有含醋酸纖維(CM)的NC膜結合力會有所降低。另外提醒一句：由于NC膜上結合的蛋白會因為一些去污劑而被代替，因此在封閉時好使用較溫和的Tween20，而且濃度不要超過0.3%(據說0.05%效果好)。一般而言，NC膜越純，其蛋白結合能力就越高，所以要增加WB的靈敏度和分辨率，提高所使用膜的純度是個可以考慮的選擇。如果NC膜攙雜一些醋化纖維素--這在前面已經提到，會影響蛋白質結合。Protran由于是純NC膜，比較脆，機械耐受力欠佳，需要小心操作，如果擔心自己“粗手粗腳”，那么就可以考慮一下Optitran或者Pall公司的以耐受力著稱的BioTrace NT Nitrocellulose Transfer Membrane。卷膜肯定是實惠的選擇，只不過要自己動手裁剪--切記，必須帶手套操作。
*纖維素膜生產商：
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GE WHATMAN BA83 BA85 價格 1950.00/卷 有現貨
WHATMAN轉印跡膜轉印膜10401396 10401196WHATMAN*纖維素膜(NC膜)轉印跡膜轉印膜10401396 10401196其它的*纖維素雜交膜可能含有大量的醋酸纖維素，這會降低蛋白的結合能力。Protran雜交膜采用純*纖維素制成，具有好的操作強度，兼容多種檢測方法，包括同位素法，化學發光法(以luminol為基礎)，比色法和熒光法等。
與PVDF膜相比，Protran*纖維素膜在使用中不需要甲醇預濕步驟，這使它可以用于那些需要親水性環境的蛋白質的轉移，在轉移之前，膜僅需要在水中簡單潤濕，然后置于轉移緩沖液中，而不再需要其它預濕步驟。
高結合力，低背景
除了具有高結合能力以外，Protran*纖維素膜本身產生的背景非常低，膜*的表面性質保證了優異的信噪比，而同時卻不需要嚴格的清洗條件。
小分子蛋白的高保留率
Protran*纖維素膜有多種孔徑大小可供選擇，使不同的應用都可以獲得佳的效果。0.2μm孔徑的Protran BA83*纖維素膜通過減少小分子“下漏”來保留分子量小于20KD的蛋白質分子。0.45μm孔徑的Protran BA85*纖維素膜是較大分子量樣品和常規核酸研究的理想選擇。0.1μm孔徑的Protran BA79則用于分子量低于7kD的小分子蛋白轉移。
Protran*纖維素膜的一個主要優勢在于，經實驗證明，結合在Protran膜上的蛋白能夠保持分子識別活性長達5年。
Protran雜交三明治組合
由1張預切的*纖維素膜和2張3MM層析雜交紙組成的三明治包裝，幫您節省更多的時間。這些膜都是用于雜交的質量好的NC膜——Protran BA83或者BA85。
Protran *纖維素膜的結合能力為80~150µg/cm2，可高壓滅菌(液體冷循環)
GE RPN303C
PALL 66485 常用的NC膜 30cm*3m/卷超低*：1250.00/卷現貨
2. PVDF膜
與*纖維素膜相比，PVDF膜在蛋白質截留能力，機械強度和化學相容性上都更*的性能。市售*纖維素膜的典型結合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜結合量是100-200μg/cm2(而結合強度PVDF比硝纖膜強6倍！)。但是PVDF膜大的優點不僅于此：更好的機械強度和化學耐受性使PVDF膜在各種染色應用和多重免疫檢測中成為理想選擇；而且單個凝膠的泳道復本可用于多種目的，特別是需要做N端蛋白測序，在相當“嚴酷”的清洗條件下，當尼龍或者硝纖膜已經降解的情況下PVDF膜依然保持本色，笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白測序的*選擇。但不適合熒光。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預處理(不超過15秒)再用緩沖液平衡，才能用，而且適用過程中萬一干了也要同樣程序再處理(不過要真出現這種問題也是自己欠扁，誰要你不小心呢，轉膜前處理也就罷了，轉膜后再這樣處理可能會影響后繼的抗體識別呢)。PVDF膜同樣分0.45um和0.2um的，后者孔徑小，對小分子蛋白有較好的攔截吸附，背景可能會比前者稍高。
pvdf膜生產商：
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MILLIPORE * 常年 現貨
IPVH00010 0.45um 1650.00/卷
ISEQ00010 0.22um 2050.00/卷
PALL 66543 2150.00/卷
卷膜經濟實惠，裁剪剩下的邊角料還可以用來做點雜交。再次強調的是，疏水PVDF膜在用前必須經過50%或以上體積比的甲醇或者乙醇溶液處理幾分鐘，待膜變成半透明后用純水漂洗一下，轉入電泳緩沖液平衡才能用
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